SDLABIO Kammerobjektträger

Die Schritte zur Verwendung einer Zellkulturkammer, wie z. B. Falcon-Kammerobjektträger, können je nach spezifischem experimentellem Zweck und Probentyp variieren. Im Folgenden sind die allgemeinen Schritte aufgeführt:
1. Vorbereitung
Reinigung und Desinfektion: Stellen Sie vor der Verwendung sicher, dass die Zellkultur-Kammerobjektträger sauber und steril sind. Bei neuen Produkten sind diese in der Regel vorsterilisiert und können direkt verwendet werden. Bei Wiederverwendung reinigen Sie diese zunächst gründlich mit einem Reinigungsmittel, um restliche Verunreinigungen zu entfernen, spülen Sie sie dann mehrmals mit destilliertem Wasser ab. Anschließend können sie durch Autoklavieren sterilisiert oder mit 75%igem Alkohol abgewischt und dann zum Trocknen und zur Verwendung stehen gelassen werden.
Vorbereitung der experimentellen Materialien: Bereiten Sie die benötigten Zellen, das Kulturmedium, Pipetten, Pipettenspitzen, sterile Reagenzien usw. vor. Stellen Sie außerdem die experimentellen Instrumente wie die Sicherheitswerkbank, die Zentrifuge und das Mikroskop auf einen normalen Arbeitszustand ein.
2. Probenzugabe
Zellproben: Wenn sie für Zellkulturexperimente in den Zellkultur-Objektträgern verwendet werden, aspirieren Sie in der Sicherheitswerkbank mit einer Pipette eine angemessene Menge Zellsuspension in der logarithmischen Wachstumsphase mit gutem Zellstatus und geben Sie diese langsam in jede Kammer der Zellkulturkammer. Bestimmen Sie im Allgemeinen die Zellaussaatdichte entsprechend der Größe der Kammer und den experimentellen Anforderungen. Bei einer üblichen 4-Kammer-Zellkulturkammer beträgt die Anzahl der pro Kammer ausgesäten Zellen beispielsweise ungefähr (1×10⁴–1×10⁵). Nach der Aussaat überführen Sie die Zellkulturkammer vorsichtig in den Zellinkubator und kultivieren Sie sie unter geeigneten Bedingungen (z. B. 37 °C, 5 % CO₂), damit die Zellen haften und wachsen können.
Gewebeproben: Wenn Sie Gewebeschnitte beobachten, behandeln Sie die Gewebeproben zunächst durch Fixierung, Dehydrierung, Einbettung usw. vor und stellen Sie Schnitte mit einer geeigneten Dicke (normalerweise 4–10 μm) her. Legen Sie die Schnitte dann vorsichtig mit einer Pinzette in die Kammer der Zellkulturkammer und achten Sie darauf, dass die Schnitte flach liegen. Eine kleine Menge Klebstoff (z. B. Poly-L-Lysin) kann verwendet werden, um die Schnitte besser auf dem Objektträger haften zu lassen.
3. Experimentelle Behandlung
Wirkstoffbehandlung: Nachdem die Zellen in der Zellkulturkammer haften, geben Sie bei einem Wirkstoffexperiment gemäß dem Versuchsdesign mit einer Pipette Wirkstofflösungen unterschiedlicher Konzentrationen in jede Kammer und richten Sie gleichzeitig eine Kontrollgruppe ohne Wirkstoff ein. Das Volumen des Wirkstoffs muss entsprechend der Größe der Kammer und den experimentellen Anforderungen bestimmt werden. Geben Sie im Allgemeinen 100–500 μl pro Kammer hinzu, um die voreingestellte Konzentration des Wirkstoffs im Kulturmedium zu erreichen. Nach der Zugabe des Wirkstoffs schütteln Sie die Zellkulturkammer vorsichtig, um den Wirkstoff gleichmäßig zu verteilen.
Färbebehandlung: Wenn Sie ein Färbungsexperiment in der Zellkulturkammer durchführen, z. B. eine H&E-Färbung von Zellen, aspirieren Sie zunächst das Kulturmedium in der Kammer und spülen Sie die Zellen 2–3 Mal vorsichtig mit PBS-Puffer, um das restliche Kulturmedium zu entfernen. Geben Sie dann nacheinander Hämatoxylin-Färbelösung, Eosin-Färbelösung usw. zur Färbung hinzu. Die Färbezeit richtet sich nach den Anweisungen der Färbelösung und den experimentellen Anforderungen, im Allgemeinen 3–5 Minuten für die Hämatoxylin-Färbung und 1–3 Minuten für die Eosin-Färbung. Spülen Sie nach der Färbung mit fließendem Wasser, um die überschüssige Färbelösung zu entfernen.
4. Beobachtung und Aufzeichnung
Mikroskopische Beobachtung: Legen Sie nach Abschluss der Behandlung die Zellkammerobjektträger auf den Objekttisch des Mikroskops. Suchen Sie den Probenbereich zunächst mit dem schwachen Objektiv und wechseln Sie dann für eine detaillierte Beobachtung zum starken Objektiv oder zum Ölimmersionsobjektiv. Achten Sie bei der Beobachtung darauf, Parameter wie Fokus, Helligkeit und Kontrast anzupassen, um ein klares Bild zu erhalten. Bei der Beobachtung der Zellmorphologie in der Zellkulturkammer können beispielsweise Merkmale wie der Zellumriss, die Größe und das Verhältnis von Kern zu Zytoplasma beobachtet werden; bei der Beobachtung von Gewebeschnitten können die Gewebeschichten und Zellanordnungen beobachtet werden.
Bildaufzeichnung: Wenn die experimentellen Ergebnisse des Mikroskop-Kammerobjektträgers aufgezeichnet werden müssen, kann das Bildgebungssystem des Mikroskops oder eine angeschlossene Digitalkamera zum Fotografieren verwendet werden. Wählen Sie beim Fotografieren repräsentative Gesichtsfelder für die Aufnahme aus und notieren Sie die Aufnahmebedingungen (z. B. Vergrößerung, Belichtungszeit usw.). Für dynamische Experimente, wie die Beobachtung des Zellbewegungsprozesses in den Mikroskop-Kammerobjektträgern, kann die Zeitraffer-Bildgebungstechnologie verwendet werden, um in regelmäßigen Abständen ein Foto aufzunehmen und die Veränderungen der Zellen im Laufe der Zeit aufzuzeichnen.
5. Nachbehandlung
Reinigung und Lagerung: Wenn die Zellkulturkammer wiederverwendet werden soll, entfernen Sie die Proben und Flüssigkeiten in der Kammer so bald wie möglich nach dem Experiment. Behandeln Sie sie dann gemäß den Reinigungs- und Desinfektionsschritten aus der Vorbereitung, trocknen Sie sie und lagern Sie sie ordnungsgemäß.