Lâmina de Câmara SDLABIO

As etapas de uso de uma câmara de cultura de células, como as lâminas de câmara falcon, podem variar dependendo do objetivo experimental específico e do tipo de amostra. A seguir, estão as etapas gerais:
1. Preparação
Limpeza e Desinfecção: Certifique-se de que a lâmina de câmara para cultura de células esteja limpa e estéril antes do uso. Se for um produto novo, geralmente é pré-esterilizado e pode ser usado diretamente. Se for reutilizado, primeiro limpe-o completamente com um detergente para remover impurezas residuais, depois enxágue várias vezes com água destilada. Em seguida, pode ser esterilizado em autoclave ou limpo com álcool a 75%, e deixado secar para uso.
Preparar Materiais Experimentais: Prepare as células necessárias, meio de cultura, pipetas, pontas de pipeta, reagentes estéreis, etc. Além disso, ajuste os instrumentos experimentais, como o fluxo laminar, centrífuga e microscópio, para um estado de funcionamento normal.
2. Adição de Amostra
Amostras de Células: Se utilizado para experimentos de cultura de células nas lâminas de câmara para cultura de células, no fluxo laminar, use uma pipeta para aspirar uma quantidade adequada de suspensão celular em fase de crescimento logarítmico com bom estado celular e adicione lentamente a cada câmara da câmara de cultura de células. Geralmente, determine a densidade de semeadura celular de acordo com o tamanho da câmara e os requisitos experimentais. Por exemplo, para uma câmara de cultura de células comum de 4 poços, o número de células semeadas por poço é aproximadamente (1×10⁴-1×10⁵). Após a semeadura, transfira suavemente a câmara de cultura de células para a incubadora de células e cultive sob condições apropriadas (como 37°C, 5% CO₂) para permitir que as células adiram e cresçam.
Amostras de Tecido: Se for observar cortes de tecido, primeiro pré-trate as amostras de tecido por fixação, desidratação, inclusão, etc., e faça cortes com espessura apropriada (geralmente 4-10 μm). Em seguida, coloque cuidadosamente os cortes na câmara da câmara de cultura de células usando pinças, garantindo que os cortes estejam planos. Uma pequena quantidade de adesivo (como poli-L-lisina) pode ser usada para ajudar os cortes a aderirem melhor à lâmina.
3. Tratamento Experimental
Tratamento com Fármacos: Após as células aderirem na câmara de cultura de células, se estiver realizando um experimento com fármacos, de acordo com o desenho experimental, use uma pipeta para adicionar soluções de fármacos em diferentes concentrações a cada câmara e configure um grupo controle sem fármacos ao mesmo tempo. O volume do fármaco deve ser determinado de acordo com o tamanho da câmara e os requisitos experimentais, geralmente adicionando 100-500 μL por poço para atingir a concentração pré-definida do fármaco no meio de cultura. Após adicionar o fármaco, agite suavemente a câmara de cultura de células para distribuir uniformemente o fármaco.
Tratamento de Coloração: Se estiver realizando um experimento de coloração na câmara de cultura de células, como coloração H&E de células, primeiro aspire o meio de cultura na câmara e lave suavemente as células 2-3 vezes com tampão PBS para remover o meio de cultura residual. Em seguida, adicione hematoxilina, eosina, etc., em sequência para coloração. O tempo de coloração é determinado de acordo com as instruções do corante e os requisitos experimentais, geralmente 3-5 minutos para coloração com hematoxilina e 1-3 minutos para coloração com eosina. Após a coloração, enxágue com água corrente para remover o excesso de corante.
4. Observação e Registro
Observação Microscópica: Após a conclusão do tratamento, coloque as lâminas de câmara de células na platina do microscópio. Primeiro, encontre a área da amostra sob a objetiva de baixa ampliação e, em seguida, mude para a objetiva de alta ampliação ou de imersão em óleo para observação detalhada. Preste atenção ao ajustar parâmetros como foco, brilho e contraste durante a observação para obter uma imagem nítida. Por exemplo, ao observar a morfologia celular na câmara de cultura de células, características como o contorno celular, tamanho e a relação núcleo-citoplasma podem ser observadas; ao observar cortes de tecido, as camadas de tecido e os arranjos celulares podem ser observados.
Registro de Imagem: Se for necessário registrar os resultados experimentais da lâmina de câmara de microscópio, o sistema de imageamento do microscópio ou uma câmera digital conectada pode ser usado para fotografar. Ao fotografar, selecione campos de visão representativos para capturar e registre as condições de captura (como ampliação, tempo de exposição, etc.). Para experimentos dinâmicos, como observar o processo de movimento celular nas lâminas de câmara de microscópio, a técnica de imageamento time-lapse pode ser usada para tirar uma foto em intervalos regulares, registrando as mudanças das células ao longo do tempo.
5. Tratamento Posterior
Limpeza e Armazenamento: Se a câmara de cultura de células for reutilizada, após o experimento, as amostras e líquidos na câmara devem ser removidos o mais rápido possível. Em seguida, siga as etapas de limpeza e desinfecção na preparação para tratá-la, secá-la e armazená-la adequadamente.