شريحة الحجرة SDLABIO

قد تختلف خطوات استخدام حجرة زراعة الخلايا —مثل شرائح "Falcon" الحجرية— اعتماداً على الغرض التجريبي المحدد ونوع العينة. وفيما يلي الخطوات العامة:
1. التحضير
التنظيف والتعقيم: تأكد من نظافة وتعقيم حجرة شريحة مزارع الخلايا قبل الاستخدام. إذا كان المنتج جديداً، فإنه عادةً ما يكون معقماً مسبقاً ويمكن استخدامه مباشرة. أما في حال الرغبة في إعادة استخدامه، فيجب أولاً تنظيفه جيداً باستخدام منظف لإزالة الشوائب العالقة، ثم شطفه عدة مرات بالماء المقطر. وبعد ذلك، يمكن تعقيمه إما باستخدام جهاز التعقيم بالبخار المضغوط (الأوتوكلاف)، أو عن طريق مسحه بكحول بتركيز 75%، ثم تركه ليجف تمهيداً لاستخدامه.
تحضير المواد التجريبية: قم بإعداد الخلايا المطلوبة، ووسط الاستنبات، والماصات، ورؤوس الماصات، والكواشف المعقمة، وما إلى ذلك. كما يتعين ضبط الأجهزة التجريبية — مثل خزانة التدفق الصفائحي، وجهاز الطرد المركزي، والمجهر — لتعمل في حالتها التشغيلية الطبيعية.
2. إضافة العينة
عينات الخلايا: عند استخدامها في تجارب زراعة الخلايا على شرائح زراعة الخلايا، داخل خزانة التدفق الصفائحي، استخدم ماصة لسحب كمية مناسبة من معلق الخلايا في مرحلة النمو اللوغاريتمي مع الحفاظ على حالة الخلايا الجيدة، ثم أضفها ببطء إلى كل حجرة من حجرات حجرة زراعة الخلايا. بشكل عام، حدد كثافة زرع الخلايا وفقًا لحجم الحجرة ومتطلبات التجربة. على سبيل المثال، بالنسبة لحجرة زراعة خلايا شائعة ذات 4 آبار، يكون عدد الخلايا المزروعة في كل بئر تقريبًا (1×10⁴-1×10⁵بعد زراعة الخلايا، انقل غرفة زراعة الخلايا برفق إلى حاضنة الخلايا، وقم بحضانتها في ظل ظروف ملائمة (مثل درجة حرارة 37 درجة مئوية وتركيز 5% من ثاني أكسيد الكربون) لتمكين الخلايا من الالتصاق والنمو.
عينات الأنسجة: عند فحص مقاطع الأنسجة، يجب أولاً إجراء معالجة تمهيدية للعينات، وتشمل التثبيت، ونزع الماء، والتضمين، وما إلى ذلك؛ ثم تُقطَّع العينات إلى مقاطع ذات سُمك مناسب (يتراوح عادةً بين 4 و10 ميكرومتر). بعد ذلك، تُوضع المقاطع بعناية داخل حجرة زراعة الخلايا باستخدام ملقط، مع الحرص على ضمان بقائها مسطحة ومستوية. ويمكن استخدام كمية صغيرة من مادة لاصقة (مثل "بولي-إل-لايسين") للمساعدة في تحسين التصاق المقاطع بالشريحة.
3. العلاج التجريبي
المعالجة الدوائية: بعد أن تلتصق الخلايا داخل حجرة زراعة الخلايا، وفي حال إجراء تجربة دوائية، يتم - وفقاً للتصميم التجريبي - استخدام ماصة لإضافة محاليل دوائية بتركيزات مختلفة إلى كل حجرة، مع إعداد مجموعة ضابطة خالية من الأدوية في الوقت ذاته. ويجب تحديد حجم المحلول الدوائي بناءً على سعة الحجرة ومتطلبات التجربة؛ حيث يُضاف عادةً ما بين 100 إلى 500 ميكروليتر لكل بئر، وذلك لضمان الوصول إلى التركيز الدوائي المُحدد مسبقاً داخل وسط الزراعة. وبعد إضافة الدواء، تُرجّ حجرة زراعة الخلايا برفق لضمان توزيعه بشكل متجانس.
معالجة الصبغ: في حال إجراء تجربة صبغ داخل غرفة زراعة الخلايا (مثل صبغ الخلايا بصبغتي الهيماتوكسيلين والإيوزين)، يجب أولاً سحب وسط الزراعة الموجود في الغرفة، ثم شطف الخلايا برفق لمرتين أو ثلاث مرات باستخدام محلول منظم الفوسفات (PBS) لإزالة أي بقايا من وسط الزراعة. بعد ذلك، تُضاف صبغة الهيماتوكسيلين، وصبغة الإيوزين، وغيرها من الصبغات بالتتابع لإتمام عملية الصبغ. ويُحدد زمن الصبغ بناءً على التعليمات الخاصة بالصبغة والمتطلبات التجريبية؛ حيث تتراوح المدة عموماً بين 3 إلى 5 دقائق لصبغ الهيماتوكسيلين، ومن دقيقة إلى 3 دقائق لصبغ الإيوزين. وعقب الانتهاء من الصبغ، تُشطف العينات بالماء الجاري لإزالة الصبغة الزائدة.
4. الملاحظة والتسجيل
المراقبة المجهرية: بعد الانتهاء من المعالجة، ضع شرائح حجرات الخلايا على منصة المجهر. ابدأ بتحديد منطقة العينة باستخدام العدسة الشيئية منخفضة التكبير، ثم انتقل إلى العدسة الشيئية عالية التكبير أو العدسة الزيتية (الغاطسة في الزيت) لإجراء مراقبة تفصيلية. احرص على ضبط المعايير مثل التركيز، والسطوع، والتباين أثناء المراقبة للحصول على صورة واضحة. فعلى سبيل المثال، عند مراقبة مورفولوجيا الخلايا داخل حجرة زراعة الخلايا، يمكن رصد سمات مثل المخطط الخارجي للخلية، وحجمها، ونسبة النواة إلى السيتوبلازم؛ أما عند مراقبة المقاطع النسيجية، فيمكن مشاهدة طبقات الأنسجة وترتيبات الخلايا.
تسجيل الصور: إذا دعت الحاجة إلى تسجيل النتائج التجريبية المستمدة من حجرة شريحة المجهر، فيمكن الاستعانة بنظام التصوير الخاص بالمجهر، أو بكاميرا رقمية متصلة به، لإتمام عملية التصوير. وعند التصوير، يُنصح باختيار حقول رؤية نموذجية لتوثيقها، مع تسجيل ظروف التصوير المستخدمة (مثل قوة التكبير، وزمن التعريض الضوئي، وما إلى ذلك). أما بالنسبة للتجارب الديناميكية —كعملية رصد حركة الخلايا داخل حجرات شرائح المجهر— فيمكن استخدام تقنية التصوير الفاصل الزمني (Time-lapse) لالتقاط صور فوتوغرافية على فترات منتظمة، وذلك لتوثيق التغيرات التي تطرأ على الخلايا بمرور الوقت.
5. علاج المتابعة
التنظيف والتخزين: في حال كان سيتم إعادة استخدام غرفة زراعة الخلايا، فيجب إزالة العينات والسوائل الموجودة داخل الغرفة فور الانتهاء من التجربة، وفي أسرع وقت ممكن. بعد ذلك، يُرجى اتباع خطوات التنظيف والتعقيم الموضحة في إجراءات التحضير لمعالجتها وتجفيفها وتخزينها بشكل سليم.