Portaobjetos con Cámara SDLABIO

Los pasos para usar una cámara de cultivo celular, como las cámaras portaobjetos Falcon, pueden variar según el propósito experimental específico y el tipo de muestra. A continuación se presentan los pasos generales:
1. Preparación
Limpieza y Desinfección: Asegúrese de que la cámara portaobjetos para cultivo celular esté limpia y estéril antes de su uso. Si es un producto nuevo, generalmente viene preesterilizado y se puede usar directamente. Si se va a reutilizar, primero límpiela a fondo con un detergente para eliminar impurezas residuales, luego enjuáguela varias veces con agua destilada. Después, se puede esterilizar en autoclave o limpiar con alcohol al 75% y luego dejar secar para su uso.
Preparar Materiales Experimentales: Prepare las células necesarias, medio de cultivo, pipetas, puntas de pipeta, reactivos estériles, etc. Además, ajuste los instrumentos experimentales como la campana de flujo laminar, la centrífuga y el microscopio a un estado de funcionamiento normal.
2. Adición de Muestra
Muestras Celulares: Si se utiliza para experimentos de cultivo celular en los portaobjetos de cultivo celular, en la campana de flujo laminar, use una pipeta para aspirar una cantidad adecuada de suspensión celular en fase de crecimiento logarítmico con buen estado celular, y agréguela lentamente a cada cámara de la cámara de cultivo celular. Generalmente, determine la densidad de siembra celular según el tamaño de la cámara y los requisitos experimentales. Por ejemplo, para una cámara de cultivo celular común de 4 pocillos, el número de células sembradas por pocillo es aproximadamente (1×10⁴-1×10⁵). Después de la siembra, transfiera suavemente la cámara de cultivo celular a la incubadora de células y cultívela en condiciones apropiadas (como 37 °C, 5% de CO₂) para permitir que las células se adhieran y crezcan.
Muestras de Tejido: Si se observan secciones de tejido, primero pretrate las muestras de tejido mediante fijación, deshidratación, inclusión, etc., y realice cortes con un grosor apropiado (generalmente 4-10 μm). Luego, coloque cuidadosamente las secciones en la cámara de la cámara de cultivo celular usando pinzas, asegurándose de que las secciones queden planas. Se puede usar una pequeña cantidad de adhesivo (como poli-L-lisina) para ayudar a que las secciones se adhieran mejor al portaobjetos.
3. Tratamiento Experimental
Tratamiento con Fármacos: Después de que las células se hayan adherido en la cámara de cultivo celular, si se realiza un experimento con fármacos, según el diseño experimental, use una pipeta para agregar soluciones de fármaco de diferentes concentraciones a cada cámara, y configure al mismo tiempo un grupo de control sin fármaco. El volumen del fármaco debe determinarse según el tamaño de la cámara y los requisitos experimentales, agregando generalmente 100-500 μL por pocillo para alcanzar la concentración preestablecida del fármaco en el medio de cultivo. Después de agregar el fármaco, agite suavemente la cámara de cultivo celular para distribuir uniformemente el fármaco.
Tratamiento de Tinción: Si se realiza un experimento de tinción en la cámara de cultivo celular, como la tinción H&E de células, primero aspire el medio de cultivo en la cámara y enjuague suavemente las células 2-3 veces con tampón PBS para eliminar el medio de cultivo residual. Luego, agregue secuencialmente tinción de hematoxilina, tinción de eosina, etc., para teñir. El tiempo de tinción se determina según las instrucciones del colorante y los requisitos experimentales, generalmente de 3 a 5 minutos para la tinción de hematoxilina y de 1 a 3 minutos para la tinción de eosina. Después de la tinción, enjuague con agua corriente para eliminar el exceso de colorante.
4. Observación y Registro
Observación Microscópica: Una vez completado el tratamiento, coloque las cámaras portaobjetos en la platina del microscopio. Primero, localice el área de la muestra con el objetivo de baja potencia, luego cambie al objetivo de alta potencia o al objetivo de inmersión en aceite para una observación detallada. Preste atención a ajustar parámetros como el enfoque, el brillo y el contraste durante la observación para obtener una imagen clara. Por ejemplo, al observar la morfología celular en la cámara de cultivo celular, se pueden observar características como el contorno celular, el tamaño y la relación núcleo-citoplasma; al observar secciones de tejido, se pueden observar las capas de tejido y las disposiciones celulares.
Registro de Imágenes: Si es necesario registrar los resultados experimentales de la cámara portaobjetos para microscopio, se puede utilizar el sistema de imágenes del microscopio o una cámara digital conectada para fotografiar. Al fotografiar, seleccione campos de visión representativos para capturar y registre las condiciones de captura (como aumento, tiempo de exposición, etc.). Para experimentos dinámicos, como observar el proceso de movimiento celular en las cámaras portaobjetos para microscopio, se puede utilizar la técnica de lapso de tiempo para tomar una foto a intervalos regulares y registrar los cambios de las células a lo largo del tiempo.
5. Tratamiento Posterior
Limpieza y Almacenamiento: Si la cámara de cultivo celular se va a reutilizar, después del experimento, retire las muestras y líquidos de la cámara lo antes posible. Luego, siga los pasos de limpieza y desinfección de la preparación para tratarla, secarla y almacenarla adecuadamente.