SDLABIO Камерный слайд

Этапы использования камеры для культивирования клеток, например, камерных стекол Falcon, могут варьироваться в зависимости от конкретной цели эксперимента и типа образца. Ниже приведены общие этапы:
1. Подготовка
Очистка и дезинфекция: Перед использованием убедитесь, что камера для культивирования клеток чиста и стерильна. Если продукт новый, он обычно предварительно стерилизован и может использоваться непосредственно. При повторном использовании сначала тщательно очистите его моющим средством для удаления остаточных загрязнений, затем несколько раз промойте дистиллированной водой. После этого его можно стерилизовать автоклавированием или протереть 70% спиртом, а затем оставить сушиться для использования.
Подготовка экспериментальных материалов: Подготовьте необходимые клетки, культуральную среду, пипетки, наконечники для пипеток, стерильные реагенты и т.д. Также приведите экспериментальные приборы, такие как ламинарный шкаф, центрифуга и микроскоп, в нормальное рабочее состояние.
2. Добавление образца
Клеточные образцы: При использовании для экспериментов по культивированию клеток в камерных стеклах в ламинарном шкафу с помощью пипетки отберите необходимое количество клеточной суспензии в логарифмической фазе роста с хорошим состоянием клеток и медленно добавьте ее в каждую камеру. Как правило, плотность посева клеток определяется в зависимости от размера камеры и требований эксперимента. Например, для обычной 4-луночной части камеры количество высеваемых клеток на лунку составляет приблизительно (1×10⁴ – 1×10⁵). После посева аккуратно перенесите камеру в клеточный инкубатор и культивируйте в соответствующих условиях (например, 37 °C, 5% CO₂) для прикрепления и роста клеток.Тканевые образцы: При наблюдении тканевых срезов сначала предварительно обработайте тканевые образцы путем фиксации, дегидратации, заливки и т.д., и приготовьте срезы соответствующей толщины (обычно 4–10 мкм). Затем с помощью пинцета аккуратно поместите срезы в камеру, убедившись, что они лежат ровно. Для лучшего прикрепления срезов к стеклу можно использовать небольшое количество адгезива (например, поли-L-лизина).3. Экспериментальная обработкаОбработка лекарственными препаратами: После прикрепления клеток в камере, при проведении эксперимента с лекарствами, в соответствии с дизайном эксперимента, с помощью пипетки добавьте растворы препаратов разных концентраций в каждую камеру, одновременно создавая контрольную группу без препарата. Объем препарата определяется в зависимости от размера камеры и требований эксперимента, обычно добавляя 100–500 мкл на лунку для достижения заданной концентрации препарата в культуральной среде. После добавления препарата осторожно встряхните камеру для равномерного распределения препарата.
Окрашивание: При проведении эксперимента по окрашиванию в камере, например, окрашивания клеток гематоксилином и эозином (H&E), сначала удалите культуральную среду из камеры и аккуратно промойте клетки 2–3 раза фосфатно-солевым буфером (PBS) для удаления остатков среды. Затем последовательно добавьте краситель гематоксилин, эозин и т.д. для окрашивания. Время окрашивания определяется в соответствии с инструкциями к красителю и требованиями эксперимента, обычно 3–5 минут для гематоксилина и 1–3 минуты для эозина. После окрашивания промойте проточной водой для удаления избытка красителя.
4. Наблюдение и регистрация
Микроскопическое наблюдение: После завершения обработки поместите камерные стекла на предметный столик микроскопа. Сначала найдите область образца при малом увеличении, затем переключитесь на большое увеличение или иммерсионный объектив для детального наблюдения. Во время наблюдения обращайте внимание на регулировку таких параметров, как фокус, яркость и контраст, для получения четкого изображения. Например, при наблюдении морфологии клеток в камере можно увидеть такие особенности, как контур клетки, размер и соотношение ядра к цитоплазме; при наблюдении тканевых срезов можно увидеть слои ткани и расположение клеток.
Регистрация изображений: При необходимости регистрации результатов эксперимента с камерным стеклом можно использовать систему визуализации микроскопа или подключенную цифровую камеру для фотографирования. При фотографировании выбирайте репрезентативные поля зрения и записывайте условия съемки (например, увеличение, время экспозиции и т.д.). Для динамических экспериментов, таких как наблюдение за движением клеток в камерных стеклах, можно использовать технологию покадровой съемки (time-lapse), делая снимки через равные промежутки времени для регистрации изменений клеток с течением времени.
5. Последующая обработка
Очистка и хранение: При повторном использовании камеры для культивирования клеток после эксперимента необходимо как можно скорее удалить образцы и жидкости из камеры. Затем выполните этапы очистки и дезинфекции, описанные в разделе подготовки, высушите и надлежащим образом храните.
Обычные предметные стекла в основном используются для наблюдения тканевых срезов или фиксированных образцов, в то время как камерные стекла для конфокальной микроскопии позволяют проводить непосредственное культивирование и обработку клеток, сокращая этапы переноса, что делает их более подходящими для экспериментов на основе клеток.
5. Последующее лечение
Ключевые сценарии применения камерных стекол для культивирования клеток.